Isolates of Trichoderma spp. (ACB-14, ACB-33, ACB-37, and ACB-40) and Bacillus subtilis (ACB-66, ACB-69, ACB-77, and ACB-83) were tested separately or in mixtures for suppression of postbloom fruit drop in citrus, caused by Colletotrichum acutatum. This work aimed at: (i) determining the incubation time and temperature for production of cells of biocontrol agents; (ii) determining the effect of the isolates, separately or in mixture on the germination conidia of C. acutatum; (iii) evaluating the efficiency of antagonistic isolates on detached citrus flowers and under field conditions. The results of the interactions in vitro showed that there was little differentiation in cell production among the species, and the optimum temperature was 27ºC. The best time for multiplication of bacterial cells was 36 hours, whereas for Trichoderma, the production of conidia continued to increase up to 120 hours of incubation. The mixtures of the ACB-77 plus ACB-66, ACB-33, or ACB-37 inhibited pathogen germination from 84% to 89%. Studies with detached citrus flowers showed that ACB69 alone gave 99% control. The use of mixture ACB-69 plus ACB-37 proved to be viable in the control of disease under field conditions, but the efficiency of the control was lowest than the obtained by applications of ACB-69 alone.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar sob condições de laboratório, o efeito de temperatura (15, 18, 20, 21, 24, 25, 27, 30, 33 e 35 ± 1 ºC) nas condições escuro, luz contínua e fotoperíodo 12/12 h, na produção de pseudotécios de isolados de Guignardia citricarpa, provenientes de regiões cítricolas dos Estados de São Paulo e Rio de Janeiro. Discos de folhas de limoeiro 'Cravo' (Citrus limonia), de 12 mm de diâmetro, foram autoclavados e depositadas (parte abaxial) na superfície do meio de cultura constituído por ágar-água 2%. Foram colocados quatro discos de folhas por placa onde, de forma conjunta e intercalar aos mesmos, depositaram-se dois discos obtidos de colônias de Phyllosticta citricarpa, com 21 dias de incubação. Foi, também, estudado o efeito da temperatura e do tempo de incubação (2, 8 e 16 h) na germinação dos ascósporos. Após 21 dias de incubação, a ótima temperatura ajustada pela função beta generalizada, para produção de pseudotécios deu-se a 26 e 22,5 a 27,5 °C, sob condição de escuro e de luz, respectivamente. Observou-se também produção de pseudotécios a 27 ºC em fotoperíodo 12/12 h. Em estudo complementar foi verificado que, aos 19 dias, a 27 ºC, cerca de 90% dos pseudotécios haviam alcançado a maturidade, com abundante produção de ascósporos. A maior porcentagem de ascósporos germinados foi constatada na temperatura de 24 ºC, após 16 h de incubação. Dentre as vantagens alcançadas, incluem-se a possibilidade (i) da produção massal de ascósporos em curto período de tempo, e (ii) da padronização do inóculo, tanto qualitativa, quanto quantitativa.

Four experiments were carried out at the FCAV-UNESP-Campus of Jaboticabal to evaluate the effect of temperature (15, 18, 20, 21, 24, 25, 27, 30, 33 e 35 + 1 ºC), and three light regimes (dark, continuous light and a 12/12 hour photoperiod) on the production of Guignardia citricarpa pseudothecia in citrus (Citrus sp.) areas of the States of São Paulo and Rio de Janeiro. In addition, the effects of those temperatures and periods of incubation (2, 8 and 16 h) on ascospore germination were also studied. Disks of Rangpur lime (Citrus limonia) leaves measuring 12 mm in diameter were autoclaved and transferred to Petri dishes containing 2% water-agar with the abaxial surface facing the medium. Four disks were placed in each plate equally spaced from each other. Two disks from colonies of Phyllostica citricarpa with 21 days of incubation were deposited in the center of each plate and incubated at the different temperatures. The effect of temperature on the photoperiod of 12/12 in the germination of ascospore of G. citricarpa was also evaluated. The generalized beta function was at 26, 22.5 and 27.5 ºC for conditions of darkness and light respectively. Pseudothecium production was observed in the photoperiod of 12/12 h. Mature ascospores were observed after 14 days of incubation, at 27 ºC. The highest percentage of germinated ascospores was obtained at temperatures around 24 ºC, after 16 h of incubation.

O trabalho teve por finalidade estudar a potencialidade antagonística de isolados de Bacillus subtilis a Colletotrichum acutatum, agente causal da queda prematura dos frutos cítricos (Citrus spp.) (QPFC), sob condições de laboratório e de campo. Foram estudados 64 isolados de B. subtilis, quatro isolados de Bacillus spp. e um isolado de B. thuringiensis quanto à capacidade de inibir o desenvolvimento do patógeno em cultura pareada e quanto à produção de metabólitos com atividade antimicrobiana. Os isolados mais promissores foram testados em condições de campo para controle da doença. In vitro, todos os isolados de Bacillus spp. inibiram o crescimento de C. acutatum, não havendo diferenças significativas entre eles. Os isolados de Bacillus spp. produziram, in vitro, metabólitos capazes de inibir o crescimento micelial de C. acutatum, os quais mantiveram suas atividades capazes de causar a inibição, após autoclavagem a 120 ºC, durante 20 min. Dentre os sete isolados de B. subtilis testados para o controle da QPFC, em condições naturais, o ACB-69 diferiu da testemunha e de vários outros isolados, porém equiparou-se estatisticamente ao benomyl, proporcionando menor porcentagem de flores com sintomas e maior número médio de frutos efetivos. Ainda, sob condições de campo, isolados de cada uma das espécies Trichoderma viride, T. pseudokoningii e T. aureoviride foram ineficientes, apresentando o mesmo comportamento da testemunha. Em relação aos métodos de avaliação da doença, a porcentagem de flores com sintomas foi mais eficiente do que o número médio de frutos efetivos (NMFE), uma vez que esses resultam do efeito direto do patógeno.

The present study evaluated the antagonistic potential of different isolates of Bacillus subtilis to Colletotrichum acutatum, causal agent of post-bloom fruit drop of citrus (Citrus spp.) (PFD), under laboratory and field conditions. Sixty four isolates of B. subtilis, four isolates of Bacillus spp. and one isolate of B. thuringiensis were evaluated in relation to their ability to inhibit the development of the plant pathogen in paired cultures and their production of metabolites with antimicrobial activity. The most promising isolates were tested for the control of the disease under field conditions. All the Bacillus spp. isolates induced strong inhibition on the growth of the plant pathogen. The isolates of Bacillus spp. produced, in vitro, metabolites capable of inhibiting the mycelial growth of C. acutatum, and they maintained their activities in enough concentrations to cause the inhibition, even after submitted to 120 ºC, for 20 min. The inhibition of C. acutatum by B. subtilis was due to antibiosis. Among seven isolates of B. subtilis tested for the disease control, in natural conditions, the BCA-69 differed from the control, and was statistically similar to benomyl, presenting lower percentage of symptomatic flowers and higher average number of effective fruits. An isolate of each of the species of Trichoderma viride, T. pseudokoningii and T. aureovirde were also tested, in field conditions, for controlling PFD, and none differed from the control. The percentage of symptomatic flowers was more efficient than the average number of effective fruits (ANEF) in determining the effect of the applications of the biocontrol agents on disease control.